
奥力斯 万能胶生产厂家 联系人:王经理 手机:13903175735(微信同号) 地址:河北省任丘市北辛庄乡南代河工业区柳州泡沫板专用胶厂
生物实验人、蛋白组工人日常是这样吗?
表达、纯化、质控……步骤多到想哭?
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核心知识总结
、表达系统怎么选?
原核(大肠杆菌):修饰、低成本、量 → 适简单蛋白
酵母:基础糖基化 + 二硫键 → 中等复杂度
昆虫细胞:膜蛋白、VLPs、快速验证
哺动物细胞:复杂修饰、药用蛋白(HEK293/CHO)
二、纯化三阶梯
1.亲和层析(His/GST标签)—— 富集
2.离子交换层析(电荷差异)—— 精细去除杂蛋白
3.凝胶过滤层析(分子大小)—— 抛光+换液+除聚集体
三、质控四维度
- 纯度:SDS-PAGE ≥95|SEC-HPLC 单体≥95
- 活:比活≥90|KD/EC50偏差≤15
- 杂质:HCP≤100 ppm|内毒素≤0.5 EU/mg|DNA≤10 pg/mg
- 结构:圆二谱、质谱(误差≤0.1)、肽图覆盖率≥95
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